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显色基质鲎试剂盒
显色基质鲎试剂盒

显色基质鲎试剂盒是利用人工合成的显色基质使鲎试剂产生显色反应的定量法鲎试剂。反应时间最短为16分钟,是目前反应时间最短的鲎试剂。

显色基质鲎试剂不依赖凝固蛋白形成凝胶,抗干扰能力强,特别适用于生物制品(蛋白、疫苗等)的细菌内毒素检测。显色基质鲎试剂如果配套偶氮化染色剂,灵敏度更高,并且可避开有色检品自身颜色对鲎试验的干扰。显色基质鲎试剂使用时不需要特殊的检测仪器,如果配套鲎试验微生物检测系统ELx808IULALXH可实现鲎试验微量化,自动化及标准化。

Chromogenic End-point LAL assay is a fast measurement for endotoxin quantification.

The endotoxin in the sample activates a cascade of enzymes in LAL, the activated enzyme splits the synthetic substrate, releasing a yellow-colored product with maximum absorbance at 405nm.The yellow product can further react with diazo reagents forming purple product with maximum absorbance at 545nm.

The absorbances of both yellow product and purple product are proportional to endotoxin levels, therefore, endotoxin is quantified. A regular spectrophotometer or plate reader is required for the assay.

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1. 反应时间在16分钟内出结果,是目前反应时间最短的鲎试剂。

2. 不依赖凝固蛋白形成凝胶,抗干扰能力强,特别适用于生物制品(蛋白、疫苗等)的细菌内毒素检测。

3. 配套偶氮化染色剂,可避开有色检品自身颜色对鲎试验的干扰。

4. 不需要特殊的检测仪器就能准确定量。

5. 如配套鲎试验微生物检测系统ELx808IULALXH可实现鲎试验微量化,自动化及标准化。

原理:反应混合物中内毒素浓度和在孵育终止时释放出的呈色团的量之间成正比,定量检测样品中内毒素浓度。

特点:操作简便,反应时间短,抗干扰能力强。

所需仪器:37℃恒温水浴锅+545nm波长的分光光度计(或酶标仪)。

检测限:0.01-0.1EU/ml、0.1-1.0EU/ml


一、标准曲线做不好?是何原因?

每试剂盒可做两条标曲,分别为0.1--1.0EU/ml或者0.01--0.1EU/ml;现在以0.1--1.0EU/ml为例:相应内毒素吸光度值分别是0.1、0.25、0.5、1.0EU/ml左右;

①仔细阅读说明书(特别是内毒素标准品说明书,如是血液样品,外加一份样本处理液说明书),确保操作步骤无误!

②内毒素是否有充分振摇?纯手摇几下或者摇床摇匀效果均不佳,内毒素摇匀要用漩涡振荡器震荡。

③鲎试剂是否剧烈振摇?鲎试剂要在十分钟内用完,所以先配置好内毒素工作标准品和样品,再溶解鲎试剂,鲎试剂榕溶解后轻轻混匀静置20秒。

④温育时间与温育温度是否有保证?培养箱温育效果不好,选择水浴。控制温育时间就要求加快加样速度且避免污染(温育时,整个试管上盖上铝箔纸即可,无需封口膜封口以节约时间)

二、样本如何检测?

样本初次检测需要做预实验确定样本浓度范围,建议先做0.1-1.0EU/ml标准曲线来确定样本浓度,如果测出样本超过标曲上限则选择稀释样本,若超过样本下限,则选择另一条标曲即0.01--0.1EU/ml进行检测。确定选用标准曲线后样本还需要做干扰实验验证实验的可靠性,详见说明书或中国药典。

三、血样选择什么试剂盒?

一般血浆样品选择含偶氮化试剂显色基质鲎试剂盒(试管法),抗干扰能力强。提醒客户用样本处理液处理后再进行实验。(样本处理液与抗凝剂试剂盒提供,如遇血清样品,告知总结客户反馈,检测效果可能没有那么好,建议用血浆检测)

四、检测是否可用酶标仪?

当反应终止后,可用分光光度计在波长545nm处检测,也可吸取200ul在酶标仪中检测。如无545波长,可选择540nm(注:不可在波长690nm处检测)


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