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透明质酸钠注射液细菌内毒素检查法的研究

发布时间:2017-11-24
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透明质酸钠注射液细菌内毒素检查法的研究

潘卫松1 ,肖 瑛 2

(1.广州市药品检验所 ,广东广州510610;2.暨南大学药学院 ,广东广州510632)

[摘 要]

目的:建立透明质酸钠注射液的细菌内毒素检查法。

方法:按2005版《中国药典》二部中的“细菌内毒素检查法”,用不同厂家的鲎试剂对不同批号的透明质酸钠注射液分别进行干扰试验。

结果:透明质酸钠注射液的检测浓度≤5 mg/ml时对细菌内毒素检查法无干扰。结论:透明质酸钠注射液按限值 L=0.05 EU/ml 进行细菌内毒素检查是可行的。

[关键词] 透明质酸钠注射液;细菌内毒素检查法;鲎试剂;干扰试验

透明质酸钠是广泛存在于人体内的生理活性物质,是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基乙糖组成双糖单位聚合而成的一种黏多糖。透明质酸钠注射液是透明质酸的注射用制剂,关节腔内注射可用于变形膝关节病和肩关节周围炎的辅助治疗,关节腔内给予外源性的透明质酸钠,可保护软骨、抑制炎症反应、利于软骨修复、改善润滑功能,从而可以缓解症状,增加关节活动度[1]。透明质酸钠注射液也可作为眼科手术辅助用药,前房内注射可用于白内障囊内、囊外摘除术,抗青光眼手术,角膜移植手术等,也可用于术后肠粘连[2]。为探讨采用细菌内毒素检查法检测透明质酸钠注射液的可行性,笔者参照 2005 版《中国药典》二部中“细菌内毒素检查法”的应用指导原则,对本品进行了细菌内毒素检查方法学的研究,现报道如下:

1 仪器与试药

1.1 仪器

SUB14 恒温水浴锅;MSI旋涡混合器。

1.2 试药

细菌内毒素工作标准品(规格:140 EU/支,批号:150601- 200758)及细菌内毒素检查用水(BET 水,规格:50 ml/支,批号 0612130);
鲎试剂(TAL)A 0.1 ml/支 ,批号 :0802201,灵敏度:0.25 EU/ml);
鲎试剂TAL B(厦门市鲎试剂实验厂有限公司,规格:0.1 ml/支,批号:080103,灵敏度:0.25 EU/ml)

透明质酸钠注射液(规格:2 ml∶20 mg,批号:096200、095910、095600、112800、113300、113700)。

2 方法与结果

2.1 细菌内毒素限值的确定

根据企业所附标准:透明质酸钠注射液细菌内毒素限值为0.05 EU/mg。

2.2 鲎试剂灵敏度复核试验

按照2005 版《中国药典》二部附录“细菌内毒素检查法”规定,进行鲎试剂的标示灵敏度(λ)复核。结果见表1。

图片1.png

由表1可见,2批鲎试剂经细菌内毒素工作标准品检查,λC均在0.5λ~2.0λ之间,结果均符合规定。

2.3 干扰预试验[3]

2.3.1 荧光素钠注射液有效稀释浓度(MVC)的计算:根据公式 MVC=λ/L,其中L为透明质酸素钠注射液的细菌内毒素限值 0.05 EU/mg,λ 为鲎试剂标示灵敏度,目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.50~0.03 EU/ml,则透明质酸钠注射液的对应有效稀释浓度为 :C0.5=0.5/0.05 =10.000 mg/ml,C0.25=0.25/0.05=5.000 mg/ml,C0.125=0.125/0.0500=2.500 mg/ml,C0.06=0.06/0.05=1.250 mg/ml,C0.03=0.03/0.05=0.625 mg/ml。

2.3.2 预试验:将上述系列浓度溶液记为 NPC。同时在上述NPC液中加入细菌内毒素标准溶液,使每一浓度的试验液中均含有2λ 浓度的细菌内毒素,记此系列溶液为 PPC。取两个不同厂家的鲎试剂,分别与上述 PPC和 NPC进行反应,每一浓度重复两管,并设阳性和阴性对照。结果见表 2。

由预干扰试验结果可以初步了解:两个厂家的鲎试剂对透明质酸钠注射液的细菌内毒素的试验结果在 10 mg/ml 以下浓度时均无干扰。

2.4 正式干扰试验

为了最终确认透明质酸钠注射液是否存在干扰因素的影响,笔者进行了正式干扰试验:取透明质酸钠注射液用BET水分别进行稀释,使其最终干扰试验浓度为5 mg/ml,按2005版《中国药典》二部附录中的“细菌内毒素检查供试品干扰试验项”进行试验,结果见表3。由表3可知,透明质酸钠注射液在 5 mg/ml 浓度时 Es/Et 均在0.5~2.0 范围之内,确认在 5 mg/ml 及以下浓度时无干扰。

2.5 样品细菌内毒素检查

按2005 版《中国药典》中“细菌内毒素检查法”,使用2批不同厂家的鲎试剂分别对样品进行细菌内毒素检查,并同时设立样品的自身阳性对照品,结果见表4。

图片2.png

3 讨论

由干扰预试验结果可以初步发现,透明质酸钠注射液在10 mg/ml以下稀释浓度时对两个厂家生产的鲎试剂均无干扰作用。正式干扰试验用5 mg/ml样品浓度且用两个厂家的鲎试剂结果 Es/Et均在0.5~2.0 范围之内,确认在 5 mg/ml 及

以下浓度时无干扰,限值定为 0.05 EU/mg。透明质酸钠注射液可适用细菌内毒素检查法,鲎试剂灵敏度应为 0.25 EU/ml 或0.25 EU/ml以上[4-8]。

参考文献(略)

如需全文资料,请与我司联系:0592-2085561,谢谢。

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