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鲎试验细菌内毒素检测注意事项

发布时间:2015-11-19
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鲎试验是利用鲎的阿米巴细胞与微量内毒素产生凝集反应的现象,判断样品中细菌内毒素限量是否符合规定的一种方法。它具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。但是该法受到许多因素的影响,故在做鲎试验检查时,应注意下列问题。


1 鲎试剂灵敏度

药典规定每批鲎试剂在用于试验前首先核对灵敏度。因为鲎试剂由于生产厂家不同,部分鲎试剂检测同一检品时,用相同标示值的鲎试剂,出现不同结果。因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。


2 操作条件

2.1 操作熟练程度

操作时应该将手用酒精消毒,安瓿开启前应先用砂石划痕(不管是色点或包环易折安瓿),用手半拉半掰将颈部折断,千万不能用镊子敲击,防止碎玻屑掉入安瓿。在鲎试剂的溶解、样品的稀释及加入时,取样均应准确,缓缓加入避免气泡。双手避免在安瓿或试管的上方来回移动,加样后用封口膜迅速封闭管口,并立即放入恒温水浴箱中,操作要快,否则易致假阳性的出现。

2.2 温度

温度对鲎试剂的灵敏度影响很大,随着温度的升高以及延长保温时间,鲎试剂的灵敏度亦增大,增加假阳性。温度过高会破坏鲎试剂。应控制在(37±1)℃之间,保温(60±2)min。

2.3 试验用的试管架最好专门定制,眼孔直径应与安瓿或试管直径相接近,左右晃动。水浴箱要放置不要倾斜,保温过程中不可随时取出观察。防止试管受到振动鲎试剂与细菌内毒素形成的凝胶受到振动后易变形而误判为阴性。


3 其它

3.1 供试品稀释

选用更高灵敏度的鲎试剂,则应增加样品的稀释倍数。

3.2 所用器皿均应彻底洗净和灭菌安全

实验用器皿均应充分洗涤并冲洗干净,特别是接触酸碱或用洗衣粉、洗液等洗涤后,更应冲洗干净,以免残留物破坏极微量的内毒素。