文章首次发表于
《中国医学装备》杂志
文中实验所用内毒素检测试剂盒、鲎试验微生物快速检测系统(ELx808IULAXH)及无热原耗材均为（厦门鲎试剂生物科技股份有限公司）产品
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王苏湘 滕朝宇 吴瑕 王宇 (排名不分先后)
[文章编号]1672-8270（2019）07-0059-06[中图分类号]R197.39[文献标识码]A
关键词：
血液透析；内毒素检测试剂盒；厦门鲎试剂；厦门鲎试剂凝胶法鲎试剂；厦门鲎试剂动态浊度法鲎试剂盒；厦门鲎试剂鲎试验微生物快速检测系统ELx808IULALXH；标准要求；内毒素控制
摘要
目的：依据血液透析治疗对内毒素的相关标准要求，采用鲎试剂法对透析液的内毒素含量进行检测，基于戴明循环（PDCA）管理模式加强对透析治疗过程管控，以提高透析治疗的医疗质量。
方法：使用透析专用鲎试剂（凝胶法）对内毒素进行定性及半定量检测，动态浊度法鲎试剂检测内毒素浓度，根据国际标准及行内标准，判断所测的透析液是否合格。
内毒素与血液净化
1.1内毒素与鲎试剂法
鲎试剂法是目前测定内毒素的主要方法，该方法检测内毒素特异性强、灵敏度高且操作方法简便，美国药典（USP）和中国药典（CP）均已收载。检测方法有凝胶法和光度测定法，光度测定法又包括浊度法和显色基质法。鲎试剂中的C因子能够与内毒素反应，激活B因子，活化后的B因子使凝固酶原变成凝固酶，凝固蛋白原在凝固酶的作用下形成凝固蛋白，最终形成凝胶。
1.2内毒素污染来源
与透析有关的内毒素污染来源主要包括以下4个方面。
（1）水前处理系统。透析用水的处理系统包括沉淀过滤器、软水器、活性碳过滤器等水质前处理系统，以及逆渗透膜系统或去离子器和超过滤器等。
（2）反渗水输送管道。管径大小、材质和结构的不同会造成细菌滋生，甚至会形成生物膜附着在管路的表面而有利细菌的滋生，污染复用用水。
（3）透析浓缩液配制的过程环节，透析浓缩液的污染，重碳酸盐透析液非常容易滋长细菌。
（4）透析机的污染，上下机及两班连台之间的消毒控制。
1.3内毒素超标的临床表现
血液透析设备系统消毒过程中透析用水、透析浓缩液及透析液内毒素超标会将内毒素带入尿毒症患者血液，导致尿毒症患者产生内毒素血症。内毒素作用于吞噬细胞、中性粒细胞、内皮细胞、血小板、补体系统以及凝血系统，并诱生肿瘤坏死因子a（tumor necrosis factor-x，TNF-a）、白细胞介素-1（interleukin，IL-1）、IL-6和IL-8、组胺以及激肽等生物活性物质，使组织器官毛细血管灌注不足，出现缺氧及酸中毒等。
高浓度的内毒素也可激活补体替代途径，引发高热、低血压以及活化凝血系统，最后导致弥散性血管内凝血。严重时可导致微循环衰竭和低血压为特征的内毒素休克甚至死亡。发现后要检查原因，感染者应给予抗感染治疗。
2.1 检测样本及样品收集
（此处省略部分内容，如有兴趣了解，可联系我司获取此部分内容。）
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厦门鲎试剂销售热线：0592-2085561
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2.2 仪器与试剂
采用ELx808IULALXH型鲎试验微生物快速检测仪（美国Bio-Tek公司授权厦门鲎试剂生物科技有限公司代理出售）；涡旋振荡仪；恒温水浴锅。透析专用鲎试剂检测试剂盒（0.25EU/ml，Lot No 130725，Lot No 140825）、透析专用鲎试剂检测试剂盒（0.5EU/ml，Lot No 120916，Lot No140705）、透析专用鲎试剂检测试剂盒（2EU/ml，Lot No130620，Lot No 140825，Lot No 151201）和动态浊度法鲎试剂盒（Lot No180627B）均来源于厦门鲎试剂生物科技股份有限公司。细菌内毒素工作标准品，无热原吸头，细菌内毒素检查用水，无热原板条，无热原接收管。
2.3 透析相关细菌内毒素限值
（此处省略部分内容，如有兴趣了解，可联系我司获取此部分内容）
2.4 凝胶法检测内毒素（透析专用鲎试剂）
（1）阴性对照溶液的制备。
（2）阳性对照溶液的制备。
（3）样本溶液的制备。用无热原采样瓶收集适量的透析用水或透析液。按鲎试剂的灵敏度（入）及样本的内毒素限值（L）计算样品的最大有效稀释倍数（maximum allowable dilution，MVD），其计算为公式1：MVD=L/入
（4）样本阳性对照溶液的制备。
（5）实验操作。从试剂盒内取出8支鲎试剂，开启，设置检查项目及加样见表1。
（6）结果判断。将安瓿从恒温水浴锅中轻轻取出，缓慢倒转180°。若安瓿内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（一）。
（7）当阴性对照管结果均为阴性，阳性对照管和样品阳性对照管为阳性，实验有效，否则无效，应重复实验。
2.5动态浊度法检测内毒素
（1）程序设置。
（2）标准曲线制备。
（3）标准曲线及样品检测。
（4）数据处理。
设定启动OD（一般设定为0.02），软件自动给出启动时间。建立标准曲线为公式2：
y=-ax+b（2）
式中y为启动时间的对数值，x为内毒素浓度的对数值，a为直线斜率，b为y轴截距。
当阴性对照的反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间，标准曲线的相关系数|r|≥0.980，标准曲线成立。
3结果
3.1透析专用鲎试剂（凝胶法）
检测2014-2017年采用3种规格透析专用内毒素凝胶法检测试剂盒检测结果见表2。（数据有删减）
检测数据表明，严格执行相关标准及操作规程后，
2014-2017年透析用水及透析液检测结果均为阴性合格。
3.2动态浊度法检测
内毒素浓度标准曲线中Y=-0.2593X+2.938