有些样品严重干扰鲎试验生化反应,甚至使反应不能进行。这就需要采用特殊方法对样品进行预处理。
1 稀释法
相当大一部分样品的干扰因素在一定浓度下才起作用,把样品适量稀释后即可按常规方法测定。如甘露醇、庆大霉素、人血白蛋白、肝素钠和维生素C等注射液等。
2 加热法
有些干扰因素为不耐热的物质,将样品在适当温度下保温一段时间,即可按常规方法测定。如某些血液制品和生物药品等。
3 调整pH值法
有些样品PH值偏高或偏低,且鲎试剂中pH缓冲剂不能将反应液调整至正常范围。这时可用预先处理并已确认无菌无热原的盐酸或氢氧化钠液调整样品液pH。然后按常规方法测定,
如氨基酸注射液。
4 超滤─反冲法
一般中草药注射液成份复杂,干扰因素较多,难以用普通方法加以消除,即可用超滤法。取样品适量,进行超滤,样品药液全部压滤通过滤膜,内毒素被阻滤在超滤膜片上,再取少量无热原水冲洗滤器、滤膜。卸开滤器,将超滤膜反向放置滤器上,严密固定。再用无热原水将内毒素从超滤膜上冲至一量瓶中,精密加水至刻度。冲洗液按常规方法测定。
5 固体样品
若固体样品为可溶性物质,用无热原水溶解,按上述方法进行干扰样品试验。
手术器械、一次性输液器等固体物品的内毒素测定,用适量无热原水按规定方法浸泡或冲洗即可。内毒素的水溶性较大,器具内表面或外表面的内毒素经适当时间、适当温度浸泡或冲洗,即可溶入液体,按常规方法测定。
对于复杂样品还需将上述各法联合应用。但不管单独用其一法,或二法、三法联用,在操作过程中均有可能出现抑制或增敏等干扰作用,使测定浓度高于或低于实际浓度,这时必须做回收率实验,并根据测得的回收率求算内毒素的实际值。
同目前国前国内外各实验室对干扰样品的试验报导结果差异很大,这是很正常的。因为国内外尚无规模细菌内毒素定量测定技术,为此从定量测定的技术高度来规范样品的干扰试验是不可或缺的。