细菌内毒素检查法（BET）是利用鲎试剂来检测供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，拥有操作简单、灵敏度高、专属性强、试验结果易判断等优点， 因而被广泛应用于药品、医疗器械、临床医学研究，各种水源、食品、动物饲料等方面的体外内毒素检查。BET的反应机理是一系列的酶促反应，任何影响反应机制因素的干扰，都会导致检查结果的异常。特别是近些年生物医药的样本组分越发复杂，对去除内毒素检测干扰提出更大的挑战。

厦门鲎生科·BIOENDO给大家整理了以下检测样本时可能产生干扰的因素都有哪些：

环境内毒素无处不在，操作环境及操作不当可使在操作过程中带来污染，所用器具处理不当，被外来的内毒素污染，都很容易导致假阳性结果。因此BET应在符合规定的净化间或操作台进行，尽量防止外源性内毒素的污染。所用器材应清洗干净，用酸、碱洗液或洗涤剂清洗后, 应反复冲洗干净，避免残留的内毒素。如玻璃容器须在250℃干热灭活至少30min。采样用注射器及吸管应有良好的精密度，玻璃容器材质应选用耐酸、碱的硬质玻璃，胶管、胶塞应使用优质医用产品。实验所接触的器皿耗材均要无内毒素，以避免外源引入污染。操作人员在试验过程中勿大声讲话和急速行动，防止尘埃和唾液溅入检品中。

供试品的种类不同，对于BET的干扰因素不同，下面列举了几种常见的干扰因素及其解决方式。

二价阳离子：二价阳离子浓度不足(如Mg²⁺离子)，内毒素无法激活鲎试剂中的酶，反应被抑制。可通过使用钙镁离子添加剂（BY01）解决，注意过高的二价阳离子（如Ca²⁺）浓度可能会对试验带来抑制作用。

高渗透压：较高浓度的糖或盐通常会抑制BET，可使用BET水在允许范围内进行稀释消除干扰。

酶、酶抑制剂：供试品若含有丝氨酸蛋白酶会增强反应，若含有丝氨酸蛋白酶抑制剂会抑制反应。通常的消除干扰的方式为：使用BET水或厂家提供的样本处理液（ST09）稀释10倍，然后75℃加热10分钟，冷却至室温后再检测。

非内毒素反应物：β-葡聚糖会造成实验结果假阳性，可使用G因子抑制剂（BT02）消除干扰。或使用内毒素检测试验进行检测。

洗涤剂：高浓度的洗涤剂会使鲎试剂的蛋白失活，可对供试品进行稀释降低干扰。

油脂类：脂类包裹内毒素，使内毒素无法暴露出来，实验结果将出现假阴性，可通过添加分散剂（PBS50）的方式去除干扰。

一般供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范围内为宜，pH值过高或过低，均可抑制鲎试剂与内毒素的反应， 使鲎试剂灵敏度下降。可以通过酸碱缓冲液（BH02）调节供试品的pH值，使其处于最佳的pH范围。

《中国药典》规定鲎试验反应温度在37±1℃，凝胶法试验需要注意温育时间60±2min。温度过低，凝胶化推迟，温度过高则破坏鲎试剂，阻止凝胶反应；延长温育时间， 则提高了鲎试剂的灵敏度，易出现假阳性。光度法、重组C因子荧光法、重组级联试剂显色法(RCR0428)需要注意检测设备（鲎试验微生物快速检测系统ELx808IU-SN）温控性能。

凝胶法试验在温育过程和取放安瓿时要小心避免振动造成假阴性。

BET结果会受多种因素的干扰，造成结果异常。我们在实验过程中，应按药典规定的操作规程、实验条件、厂家专业培训指导，排除各种干扰因素，保证实验结果准确可靠。

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